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高通量測序(NGS)

高通量測序(NGS)也稱二代測序、深度測序、下一代測序、大規模平行測序等。主要有2家平臺:Illumina公司(簡稱“ILMN”),ThermoFisher公司的Life Technologies的Ion Torrent。Illumina技術是所有二代測序中簡單直接的,具有良好的穩定性和可靠性、重復性強、數據質量高、錯誤率低。

Illumina測序技術是目前應用最為廣泛的,目前已發表的文章絕大多數采用此技術和方法。其原理為測序技術可以生成高密度、海量平行測序反應,可對每個流動槽中成百上千萬的模板進行單端或對讀測序。全自動的illumina簇生成工作站在恒溫條件下在流動槽表面擴增生產DNA簇,每個簇含有單個模板分子的500-1000克隆拷貝。用全自動基因分析儀在流動槽表面對生成的高密度序列模板進行測序。采用專有的熒光標記的可逆終止核苷酸,可對樣本邊合成邊測序。對讀測序時,完成首次讀取后,DNA簇進行原位改良,在生成對讀所用的模板。然后應用第二個測序引物對同一DNA簇測序,生成第二次數據。因而廣泛應用于SNP和結構變異檢測、從頭測序組裝、轉錄組測序、甲基化檢測等。