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熒光定量PCR(real-time quantitative PCR,QPCR或RQ-PCR)

熒光定量PCR技術,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種核酸定量技術,實現了PCR從定性到定量的飛躍,基于熒光能量傳遞技術(fluorescence resonance energy transfer,FRET),通過檢測PCR過程的熒光訊號而得知靶基因的初始濃度。熒光定量PCR技術在常規PCR基礎上通過加入熒光標記探針以實現其定量功能,具有高靈敏性、高特異性和高精確性的特點。目前已被應用于病原體測定、腫瘤基因檢測、免疫分析、基因表達、突變和多態性研究等多個領域。

熒光定量PCR應用簡化了檢測過程,其反應速度快,靈敏度高,特異性強,可重復性好,閉管操作,目前已被國內外多家廠家制成試劑盒,在臨床推廣。

數字PCR(Digital PCR,ddPCR或3dPCR)

該技術是一種新的DNA檢測和絕對定量方法。與傳統定量PCR(qPCR)技術不同,數字PCR是將傳統PCR的指數倍信號轉換成線性的數字信號,通過特定的儀器讀值,并利用統計學方法來對PCR產物進行分析。

目前數字PCR技術包含微滴式和微孔式檢測平臺,原理都是將含有核酸分子的反應體系分成成千上萬個單分子體系后,將單分子模板進行PCR擴增和核酸拷貝數精確定量。